Методы определения общего белка в сыворотке крови

Содержание

Анализ на фракции белков: нормы и отклонения, показания

Методы определения общего белка в сыворотке крови

Человеческий сывороточный альбумин

Альбумины и глобулины — основные группы протеинов плазмы. Анализ на отдельные фракции белков служит маркером нарушений белкового обмена, позволяет выявить различные патологии, осуществлять мониторинг изменений при заболеваниях, выбрать эффективную тактику лечения.

Альбумины (А) выполняют множество задач в организме человека: поддерживают онкотическое давление крови, обеспечивают целостность сосудистых барьеров; транспортируют жирные кислоты, гормоны, витамины; связываются с производными различных веществ, ограничивая их вредное воздействие на клетки; взаимодействуют с факторами свёртывания, служат источником аминокислот.

Структура глобулина

Глобулины (Г) представляют собой разнородную группу:

  • α1-Г: переносят липиды, кислоты, гормоны; участвуют в процессах коагуляции, ингибируют различные ферменты.
  • α2-Г: связывают гемоглобин и ферменты, транспортируют витамины и атомы меди, регулируют процессы свёртывания.
  • β-Г: транспортируют липиды и железо; связываются с половыми гормонами, белками и иными элементами.
  • γ-Г: преимущественно представляют собой иммуноглобулины, основная функция которых состоит в нейтрализации вредоносных агентов, проникающих в организм.

Нормы для белковых фракций

При проведении анализа учитывается соотношение альбумины/глобулины

В анализе учитывается соотношение фракций А/Г, норма этого значения =1:2.

Референсные значения для фракции альбумина.

ВозрастА (г/л)
0 – 4 дня28 – 44
4 дня – 14 лет38 – 54
14 – 18 лет32 – 45
старше 18 лет35 – 52
соотношение к общему белку (%)54 – 65

Норма для фракции глобулинов.

Возрастα1-Г (г/л)α2-Г (г/л)β-Г (г/л)γ-Г (г/л)
0 – 7 дней1,2 – 4,26,8 – 11,24,5 – 6,73,5 – 8,5
7 дней – 1 год1,24 – 4,37,1 – 11,54,6 – 6,93,3 – 8,8
1 год – 5 лет2,0 – 4,67,0 – 13,04,8 – 8,55,2 – 10,2
5 – 8 лет2,0 – 4,28,0 – 11,15,3 – 8,15,3 – 11,8
8 – 11 лет2,2 – 3,97,5 – 10,34,9 – 7,16,0 – 12,2
11 – 21 год2,3 – 5,37,3 – 10,56,0 – 9,07,3 – 14,3
старше 21 года2,1 – 3,55,1 – 8,56,0 – 9,48,1 – 13,0
соотношение к общему белку (%)2 – 57 – 138 – 1512 – 22

Нормативные значения могут отличаться в зависимости от лаборатории.

Отклонения от нормы: причины повышения и понижения

Кишечные инфекции могут стать причиной обезвоживания

Повышение уровня альбумина:

  • обезвоживание,
  • инфекционные заражения,
  • обширные ожоги и травмы.

Понижение уровня альбумина:

  • бактериальное инфицирование,
  • паразитарное поражение,
  • последствие кровотечения,
  • злокачественные новообразования,
  • эрозивно-язвенные поражения тонкой кишки,
  • заболевания почек,
  • коллагенозы,
  • острые и хронические болезни печени,
  • нарушение белкового синтеза,
  • повышенный расход белка,
  • беременность.

При аутоиммунных заболеваниях повышаются гамма-глобулины

Повышенный уровень глобулинов:

  • α1-Г: обострение хронических заболеваний, повреждение тканей печени;
  • α2-Г: острые воспалительные процессы (патологии почек, пневмония и др.);
  • β-Г: нарушения липидного обмена, заболевания печени, почек, желудка;
  • γ-Г: воспалительные явления, инфицирование, гепатиты, аутоиммунные заболевания, злокачественные патологии.

Пониженный уровень глобулинов:

  • α1-Г: дефицит белков данной фракции;
  • α2-Г: сахарный диабет, гепатиты;
  • β-Г: сниженный уровень fi-протеинов;
  • γ-Г: угнетение иммунной системы.

Показания к выполнению анализа

Для назначения исследования имеется ряд показаний

Анализ назначается в следующих случаях:

  • В качестве комплексного обследования.
  • При заболеваниях, связанных с диффузным поражением соединительной ткани.
  • Инфекционные заболевания в остром и хроническом периодах.
  • Подозрение на синдром недостаточного всасывания питательных веществ.
  • При аутоиммунных патологиях.
  • При заболеваниях печени, почек.
  • Для дифференцирования отёчности.
  • Выявление злокачественных процессов.

Подготовка к тесту

Подготовка к тесту обеспечивает достоверный результат

Правильная подготовка к анализу позволяет получить корректные результаты.

  1. Последний приём пищи должен завершиться за 8 часов до исследования, но период голода должен составлять не более 14 часов. Рекомендуется пить чистую воду, исключив любые напитки.
  2. Не употреблять алкоголь за сутки до изъятия крови, курение ограничивается за час до анализа.
  3. Накануне теста не следует перегружать организм эмоционально и физически, поход в спортзал лучше отложить.
  4. Все иные исследования (рентгенография, УЗИ) проводятся после сдачи анализа.
  5. Взятие крови производится в утреннее время.
  6. На результат анализа на фракции белка влияют гормональные препараты, в том числе пероральные контрацептивы, а также цитостатические средства. Если их приём исключить невозможно, необходимо предоставить перечень препаратов врачу.

Методы определения белковых фракций

Исследование белковых фракций проводится несколькими методами

Для разделения белков на фракции используют следующие методы:

  • Высаливание. Методика основана на способности белков выпадать в осадок в присутствии растворов солей.
  • Метод Кона. Разделение на фракции при температуре от -3 до -5°С при взаимодействии разных концентраций этанола.
  • Иммунологические: иммунопреципитация, иммуноэлектрофорез, радиальная иммунодиффузия. В основе методик лежат иммунные свойства белковых фракций.
  • Хроматография. Разделение происходит в определённом слое адсорбента. Метод включает: ионообменую, аффинную, распределительную и адсорбционную хроматографию.
  • Азотометрический. Фракционирование производится при помощи разрушения белка серной кислотой.
  • Флуориметрический. Метод основан на измерении флуоресценции белка, отмеченного флуоресцамином.

Наиболее популярные методики в настоящее время:

  • Электрофорез. Методика основана на различии в скорости подвижности белков в электрическом поле.
  • Колориметрия. Измеряется интенсивность светового потока, прошедшего через окрашенный раствор.

Интерпретация результатов

Интерпретацией результатов занимается специалист

Анализ может выявить изменение общего белка плазмы. В этом случае необходимо исследовать, за счёт какой именно фракции произошло изменение.

Гиперпротеинемия — увеличение общего белка. Если при этом повышено число γ-Г, врач может заподозрить инфекционное заражение. Увеличенная концентрация β-Г чаще всего говорит о патологических процессах в печени. К α-Г относятся белки острой фазы, их рост указывает на интенсивный воспалительный процесс.

Гипопротеинемия — снижение уровня общего белка. Если снижение происходит за счёт фракций α-Г, подозревается наличие деструктивных процессов в печени, поджелудочной железе.

Показательным является дефицит фракции γ-Г, что характерно для истощения иммунной системы при хронических патологиях, злокачественных новообразованиях.

Понижение β-Г может свидетельствовать о несбалансированном питании при диетах, патологиях органов ЖКТ.

Парапротеинемия — образование нестандартных белков (парапротеинов), что увеличит фракцию γ-Г и будет свидетельствовать о ряде онкологических заболеваний, аутоиммунных патологий.

Дефектопротеинемия — отсутствие какого-либо белка, чаще всего в результате нарушения синтеза белка. Например, фракция α2-Г может быть снижена за счёт нехватки церулоплазмина, как следствия наличия болезни Вильсона.

Заболевания печени могут приводить к диспротеинемии

Диспротеинемия — нарушение количественного соотношения между фракциями белков. При этом уровень общего белка остаётся в норме. Например, при болезнях печени альбумины снижаются, глобулины (за счёт γ-Г) увеличиваются.

Таким образом, результат анализа необходимо рассматривать в комплексе, учитывая корреляцию значений отдельных фракций.

Источник: https://gidanaliz.ru/analiz/biohim/frakcii-belkov.html

Определение белков крови

Методы определения общего белка в сыворотке крови

Для рефрактометрического определения общего белка необходимо следующее оснащение рабочего места:

  1. Штатив для пробирок.
  2. Пастеровские пипетки.
  3. Центрифужные пробирки (желательно толстостенные с широким донышком).
  4. Стеклянные палочки.
  5. Водяная баня.
  6. Рефрактометр марки РЛУ (Киев).

Для проведения электрофореза на бумаге необходимо следующее оснащение рабочего места:

  1. Аппарат для электрофореза (ЭФА-1).
  2. Пробирки.
  3. Колбочки на 50 мл.
  4. Пипетки на 10 мл.
  5. Микропипетки.
  6. Стеклянная рамка.
  7. Сушильный шкаф.
  8. Кюветы.
  9. Ножницы.
  10. Фотоэлектроколориметр (ФЭК).
  11. Мединал.
  12. Веронал.
  13. Бромфеноловый синий.
  14. Сулема (HgCl2).
  15. Ледяная уксусная кислота.
  16. Едкий натр.
  17. Хроматографическая бумага № 1.

Для исследования необходима сыворотка крови.

Определение общего белка кропи с помощью рефрактометра марки РЛУ

Сущность метода состоит в определении коэффициента преломления сыворотки, величина которого зависит от содержания в ней общего белка. Коэффициент преломления сыворотки устанавливают с помощью специального прибора — рефрактометра (рис. 85). Для этого метода необходимы следующие реактивы:

  1. Насыщенный раствор сернокислого аммония: 75,4 г химически чистого (NH4)2S04 растворяют в 100 мл воды.
  2. 0,04 N раствор уксусной кислоты: 2,28 мл ледяной уксусной кислоты разводят в воде и объем раствора до¬водят водой до объема 1 л.

Рис. 85. Общий вид рефрактометра (а), горизонтальное положение камеры (б)

Проверка нулевой точки рефрактометра

Для определения нулевой точки рефрактометра камеру со зрительной трубкой переводят в горизонтальное положение (см. рис. 85, б). Приподнимают верхнюю половину камеры и на призму наносят 1-2 капли дистиллированной воды. Закрывают камеру. С помощью зеркала направляют свет в окно камеры.

Поворотом винта достигают резкой границы светотени. Окуляр шкалы и окуляр зри¬тельной трубки устанавливают на резкость. Линию окуляра шкалы устанавливают на 1,3330 и в зрительную трубку наблюдают границы светотени по отношению к точке пересечения двух взаимно перпендикулярных линий.

Совпадение границы светотени с точкой пересечения линии указывает на то, что прибор установлен на нуль. При несовпадении границы светотени на корпусе зрительной трубки с помощью ключа и маленького винта ставят границу светотени на точку пересечения линий.

Обе призмы камеры вытирают фильтровальной бумагой, а затем досуха протирают мягкой неворсистой тряпочкой.

Техника определения общего количества белка

На поверхность призмы наносят 1-2 капли исследуемой сыворотки крови и быстро закрывают камеру. Поворачивают камеру до момента совпадения границы светотени с точкой пересечения двух линий. Этот момент устанавливают при наблюдении через окуляр. По шкале производят отсчет показателя коэффициента преломления сыворотки и по табл. 12 устанавливают содержание белка в процентах.

Так, например, если показатель коэффициента преломления сыворотки равен 1,34388, то ему по таблице соответствует 4,6% белка.

После определения обе призмы тщательно промывают дистиллированной водой и досуха протирают фильтровальной бумагой и мягкой тряпочкой.

В сыворотке крови здоровых людей содержится от 6 до 8.5% общего белка.

Определение альбуминов и глобулинов с помощью рефрактометра марки РЛУ

В штатив устанавливают четыре пронумерованные центрифужные пробирки с пробками. В пробирки № 1 и 3 наливают по 1 мл 0,04 N раствора уксусной кислоты. В пробирки № 1 и 2 наливают по 1 мл исследуемой сыворотки крови.

Затем в пробирки № 3 и 4 вносят по 1 мл дистиллированной воды и этой же пипеткой, промытой несколько раз насыщенным раствором сернокислого аммония, в пробирки № 2 и 4 вносят по 1 мл насыщенного раствора, после чего все пробирки тотчас же закрывают пробками.

Содержимое пробирок взбалтывают, поколачивая их о ладонь, не менее 20 раз (все пробирки взбалтывают одинаковое число раз), после чего содержимое пробирки № 1 кипятят в водяной бане в течение 3 минут. Отделив свернувшийся белок от стенок пробирки стеклянной палочкой, смесь центрифугируют не менее 5 минут (1500-2000 об/мин). Центрифугат должен быть прозрачным.

Содержимое пробирки № 2 центрифугируют в течение 20-30 минут, центрифугат также должен быть прозрачным. Затем с помощью рефрактометра определяют коэффициент преломления реактивов каждой пробирки в отдельности.

Определение начинают с пробирки № 3, в которой 0,04 N раствор уксусной кислоты разведен в 2 раза дистиллированной водой, и № 4, содержащей насыщенный раствор сернокислого аммония, разведенный в 2 раза дистиллированной водой.

Вслед за тем определяют коэффициент преломления центрифугата в пробирке № 1.

Центрифугат этой пробирки не содержит белков, поскольку прибавление к сыворотке крови 0,04 N раствора уксусной кислоты и последующее кипячение содержимого пробирки ведут к осаждению белка.

В последнюю очередь определяют коэффициент преломления центрифугата пробирки № 2 (этот центрифугат содержит только альбумины, так как добавление насыщенного раствора сернокислого аммония приводит к осаждению глобулинов).

При определении коэффициента преломления каплю содержимого из каждой пробирки наносят на призму рефрактометра чистой сухой пастеровской пипеткой. После каждого определения призму промывают водой и протирают досуха фильтровальной бумагой и мягкой тряпочкой.

Определение производят при температуре 20°. При необходимости создают постоянную температуру, пропуская с помощью имеющегося в приборе приспособления проточную воду температурой 20°.

В результате исследования могут, например, получиться следующие показатели:

  1. Коэффициент преломления цельной сыворотки (общий белок) — 1,3490.
  2. Коэффициент преломления воды (величина постоянная) — 1,3330.
  3. Коэффициент преломления безбелкового центрифугата —1,3340 (пробирка № 1).
  4. Коэффициент преломления альбуминов — 1,3758 (пробирка № 2).
  5. Коэффициент преломления 0,04 N раствора уксусной кислоты — 1,3331 (пробирка № 3).
  6. Коэффициент преломления полунасыщенного раство¬ра сернокислого аммония — 1,3710 (пробирка № 4).

Перевод коэффициента преломления, установленного по шкале рефрактометра, в проценты белка производят по таблице Рейсса (см. табл. 12).

Пример расчета.

1. Если коэффициент преломления цельной сыворотки равен 1,3490, то по таблице Рейсса он соответствует 7,63% общего белка.

2. Чтобы определить процентное содержание альбуминов, поступают следующим образом:

  • коэффициент преломления альбуминов по шкале рефрактометра 1,3758; из коэффициента преломления альбуминов вычитают показатель преломления насыщенного раствора сернокислого аммония: 1,3758—1,3710 = 0,0048; ввиду разведения насыщенного раствора (NH4)2S04 в 2 раза полученный результат умножают на 2: (0,0048X2 = = 0,0096);
  • определяют истинное преломление безбелковых веществ — из показателя преломления безбелковых веществ вычитают показатель преломления разведенного вдвое 0,04 N раствора – СНзСООН: 1,3340-1,3331 = 0,0009; 0,0009X2 = 0,0018;
  • определяют истинное преломление альбуминов — из коэффициента преломления альбуминов (0,0096) вычитают коэффициент преломления безбелковых веществ, 0,0096-0,0018 = 0,0078;
  • определяют содержание альбуминов — коэффициент истинного преломления альбуминов делят на 0,00177 — коэффициент преломления 1% раствора альбуминов: 0,0078:0,00177 = 4,4%.

3. Чтобы определить содержание глобулинов, суммарный коэффициент преломления воды, безбелковых веществ и альбуминов вычитают из коэффициента преломления цельной сыворотки (общего белка) и делят на 0,00229 — коэффициент преломления 1% раствора глобулинов: а) 0.0096 + 1.3330=1,3426; б) 1,3490-1,3426 = 0,0064; в) 0,0064:0,00229 = 2,8%.

4. Для определения коэффициента соотношения альбуминов и глобулинов показатели содержания альбуминов делят на содержание глобулинов.

Определение фракции сывороточных белков с помощью электрофореза на бумаге (по А. Е. Гурвичу)

Сущность метода состоит в разделении белков сыворотки на бумаге с помощью электрофореза. Разделенные белки выявляются с помощью обработки полосок бумаги специальными красителями, при этом удается выделить альбумины и фракции глобулинов.

Для этого метода пользуются следующими реактивами:

  1. Вероналовый буфер (рН 8,6): 10,32 г мединала растворяют в мерной колбе на 1 л в 800 мл дистиллированной воды с добавлением 1,84 г веронала. Смесь нагревают на водяной бане до растворения веронала, а затем охлаждают; объем раствора доводят до 1 л.
  2. Краситель для окраски электрофореграмм: бромфенолового синего 0,05 г, сулемы 1 г, ледяной уксусной кислоты 2 мл, дистиллированной воды 98 мл.
  3. 2% раствор уксусной кислоты — 2 мл ледяной уксусной кислоты на 100 мл раствора.
  4. 0,1 N раствор NaOH: 2 г едкого натра помещают в мерную колбу на 500 мл и доливают водой до метки.
  5.  0,01 N раствор NaOH: 10 мл 0,1 N NaOH помещают в колбочку на 100 мл и доводят до метки дистиллированной водой. Этот реактив готовится перед началом исследования.
  6. Хроматографическая бумага № 1.

Техника проведения электрофореза

Устанавливают аппарат для электрофореза согласно указаниям инструкции к прибору. Затем хроматографическую бумагу № 1 нарезают на полоски размером 4 X 44 см, в центре бумажных полосок простым карандашом наносят одну поперечную черту, а на расстоянии 4 см от нее — другую. С этой же стороны, у конца бумажной полоски, карандашом надписывают дату исследования и фамилию обследуемого.

Подготовленную таким образом полоску бумаги равномерно натягивают на рамку прибора, которую помещают в камеру, предварительно заполненную буферным раствором. Концы бумажных полосок должны быть погружены в буферный раствор.

При этом та часть бумажной полоски, на которой помечена фамилия обследуемого и дата исследования, должна быть обращена к катоду. Прибор закрывают крышкой и выжидают, пока бумажные полоски пропитаются буферным раствором.

После этого крышку снимают и на черту, находящуюся на расстоянии 4 см от черты, проведенной карандашом в центре полоски, микропипеткой наносят 0,01-0,005 мл исследуемой сыворотки.

Если, например, необходимо нанести 0,01 мл сыворотки, то в микропипетку на 0,1 мл набирают 0,085 мл сыворотки и, едва касаясь полоски бумаги, осторожно спускают взятую сыворотку до метки 0,095 мл, распределяя ее по всей длине черты.

Наносить сыворотку у самых краев бумаги не следует.

После нанесения сыворотки прибор закрывают крышкой и подключают к сети. Электрофорез проводят при комнатной температуре. Хорошее разделение сыворотки происходит при 127—210 V в течение 18 часов.

По окончании электрофореза ток выключают, крышку снимают, бумажные полоски извлекают, подвешивают горизонтально на специальной рамке (рис. 86) и помещают на 20 минут в сушильный шкаф при температуре 105°. Затем их погружают в кювету с красителем и окрашивают в течение 20 минут бромфеноловым синим.

Краситель сливают, а электрофореграммы последовательно в нескольких порциях промывают в 2% растворе уксусной кислоты до тех пор, пока фон фореграммы полностью не отмоется от красителя (рис. 87).

Во время окраски и отмывания полоски хроматографической бумаги не должны сворачиваться и накладываться друг па друга. В результате окраски на ленте выявляются окрашенные участки, соответствующие альбуминам альфа, бетта и гамма-глобулинам.

Рис. 86. Стеклянная рамка для подвешивания бумаги

После отмывания полоски бумаги высушивают при комнатной температуре и разрезают на отдельные участки, соответствующие отдельным белковым фракциям.

При этом участки, относящиеся к альбуминовой фракции, помещают в отдельную колбочку на 50 мл, а участки, относящиеся к аг-, fi- и у-глобулинам, — в отдельные химические пробирки. К альбуминовому участку добавляют 30 мл, а к глобулиновым — по 10 мл 0,01 N раствора NaOH для извлечения (элюции) белка, окрашенного бромфеноловым синим.

Участок электрофореграммы, не содержащей белка, разрезают на кусочки шириной 1-1,5 см, помещают в отдельную химическую пробирку, предназначенную для контроля, и добавляют 10 мл 0,01 N раствор NaOH.
Колбочку и пробирки оставляют на один час при комнатной температуре для полноты извлечения.

Сразу же после окончания элюции определяют интенсивность окраски элюатов на фотоэлектроколориметре, пользуясь правым барабаном, при красном светофильтре. Кюветы используют с расстоянием рабочих граней 20 мм, колориметрирование ведут против контроля (элюат фонофореграммы).

Экстинкцию, полученную при колориметрировании фракции альбуминов, умножают на 3 в связи с тем, что для элюирования этой фракции было использовано 30 мл 0,01 N раствора щелочи.

Найденные для каждой фракции величины экстинкций складывают. Полученную сумму принимают за 100%. Например: экстинкция альбуминов 0,135X3 = 0,405;

альфа1-глобулинов    0,048;

альфа2-глобулинов    0,065;

бетта-глобулинов    0,075;

гамма-глобулинов    0,080;

Сумма экстинкций — 0,405 + 0,048 + 0,065 + 0,075 + + 0,080 = 0,673.

Принимая сумму за 100%, рассчитываем содержание каждой фракции в процентах. остальных фракций рассчитывают аналогичным образом.

Нормальное содержание белковых фракций в сыворотке крови в процентах составляет: альбумины 53-63; альфа1-глобулины 3,8-6,2; альфа2-глобулины 6,5-10,5; бетта-глобулины 10,0-15; гамма-глобулины 14,5-19,5.

Источник: http://ginekolog.my1.ru/publ/klinicheskie_issledovanija/biohim/opredelenie_belkov_krovi/45-1-0-791

Общий белок

Методы определения общего белка в сыворотке крови

Все известные способы определения концентрации общего белка подразделяют на следующие группы:

1. Азотометрические, основывающиеся на установлении количества белкового азота, для нахождения концентрации белка исходят из того, что содержание азота в белках составляет 16%, поэтому используется коэффициент 6,25. Способ неточен, так как содержание азота в различных белковых молекулах колеблется от 14 до 19%.

2. Способы, состоящие в определении плотности сыворотки — способ плавающей капли, также является неточным из-за влияния на плотность других веществ, находящихся в сыворотке.

3. Весовые (гравиметрические) — весьма трудоемки и требуют больших количеств сыворотки.

4. Рефрактометрические методы — просты в исполнении, но неточны, так как рефракция сыворотки обусловливается также минеральными веществами и углеводами.

5.Колориметрические, основанные на цветных реакциях белков:

  • методы, основанные на неспецифическом связывании красителя (простой абсорбции), достаточно чувствительны, но степень связывания красителя зависит от индивидуальных свойств белка (метод с кумасси бриллиантовым голубым).
  • биуретовый метод — наиболее широко применяется в настоящее время, основан на специфической реакции пептидной связи с ионами меди в щелочной среде с образованием продукта фиолетового цвета. Существуют разные модификации этого метода с целью увеличения интенсивности окраски и ее стабильности, повышения устойчивости реактива. Например, тартрат добавляют как стабилизатор, который при комплексировании с ионами меди предотвращает их осаждение в щелочной среде, KJ предотвращает спонтанное восстановление щелочного тартрата меди и осаждение оксида меди и, следовательно, повышает устойчивость реактива. Чувствительность и специфичность метода зависит от используемой длины волны: 540-580 нм, 263 нм или 310 нм. Метод считается самым специфичным и точным, так как присутствие ароматических аминокислот, фенолов, мочевой кислоты не влияет на биуретовую реакцию.
  • метод Лоури — основан на образовании вольфрамового синего и молибденового синего из фосфорномолибденовой и фосфорновольфрамовой солей реактива Фолина-Чикольте при взаимодействии их с ароматическими аминокислотами, в основном остатками тирозина, но определенный вклад дают триптофан, гистидин, цистеин. Максимум поглощения находится в диапазоне 745-750 нм. В составе рабочего реактива имеется биуретовый реактив, что позволяет определять также пептидные связи. К недостатку метода относится: во-первых, отрицательное влияние на развитие окраски веществ, используемых для выделения, очистки и солюбилизации белков (детергентов, компонентов буферных систем, сульфгидрильных и других восстанавливающих агентов, пуринов, глицина, сахарозы, сернокислого аммония и др); во-вторых, отсутствие линейной зависимости интенсивности окраски от количества белка-стандарта. Метод более чувствителен по сравнению с биуретовым, но специфичность его ниже, так как интенсивность окраски зависит от аминокислотного состава белка, а также от последовательности расположения аминокислот и степени экранирования функциональных групп.

6. Нефелометрические методы.

7. Поляриметрические методы.

8. Спектрофотометрические, заключающиеся в измерении степени cветопоглощения в ультрафиолетовой области при двух длинах волн с дальнейшим расчетом по специальным формулам (230 и 260 нм, 280 и 260 нм, 235 и 280 нм, 215 и 225 нм, 280 и 205 нм).

Унифицированные методы

Унифицированными методами определения общего белка являются:

  • в сыворотке крови — биуретовый метод;
  • в моче — полуколичественный метод Бранденберга-Робертса-Стольни­кова и нефелометрия (590-650 нм) после реакции с сульфосалициловой кислотой;
  • в ликворе — нефелометрия (410-480 нм) после реакции с сульфосалициловой кислотой и сульфатом натрия;
  • в жидкости серозных полостей — нефелометрия (590-650 нм) после реакции с сульфосалициловой кислотой.

Принцип

Белки реагируют в щелочной среде с сульфатом меди, образуя хелатные соединения фиолетового цвета. Интенсивность окраски пропорциональна числу пептидных связей.

Нормальные величины

Сыворотка крови (биуретовая реакция)
детиноворожденные53-89 г/л
до 6 лет56-85 г/л
взрослые65-85 г/л
Моча (нефелометрия)10-140 мг/л
Слюна0,2-0,4 г/л
Калотсутствует
Желчьпеченочная1,4-2,7 г/л
пузырная4,5 г/л
Ликвор (нефелометрия)
новорожденные0,6-0,9 г/л
взрослые0,15-0,45 г/л
Амниотическая жидкость (биуретовая реакция)
ранние сроки беременности2,0-17,0 г/л
поздние сроки беременности1,8-7,1 г/л
Жидкость серозных полостей (нефелометрия)
транссудат5-25 мг/л
экссудат30-80 мг/л

Влияющие факторы

Завышенные результаты в сыворотке крови дают пробы с билирубинемией (>85 мкмоль/л) и триглицеринемией (>11,4 ммоль/л), увеличение отмечено при венозном стазе, в положении лежа. Концентрация общего белка в спинномозговой жидкости зависит от уровня позвоночного канала, на котором была взята проба.

Клинико-диагностическое значение

Изменения концентрации общего белка могут иметь как абсолютный, так и относительный характер.

Изменения абсолютного характера являются следствием колебаний содержания белка в крови, в свою очередь относительные изменения зависят от объема крови, то есть наблюдаются при обезвоживании или гипергидратации.

Для того, чтобы отличить абсолютные изменения в плазме от относительных необходимо установить объем плазмы либо определить гематокрит.

Гипопротеинемия

Истинная (абсолютная) cвязана с:

  • недостаточным потреблением белка с пищей — заболевания желудочно-кишечного тракта, сужение пищевода (опухоли), недоедание, полное или частичное голодание.
  • снижением синтеза белка — несбалансированный аминокислотный состав пищи, хронические паренхиматозные гепатиты, интоксикации, злокачественные новообразования, лечение кортикостероидами.
  • усиленным распадом — кахексия, тяжелые инфекции, длительные воспалительные процессы, лихорадочные состояния, тиреотоксикозы.
  • потерей белка — нарушения проницаемости капиллярных стенок, кровоизлияния, ожоги, острые и хронические кровотечения, нефротический синдром и гломерулонефриты.

Относительная связана с нарушением водного баланса — гипергидратацией при гиперальдостеронизме, при почечной недостаточности со снижением экскреции солей, при использовании для питья морской воды, при неадекватных инфузиях солевых растворов.

Гипопротеинемия обычно сопровождается уменьшением фракции альбуминов крови (разведение).

Гиперпротеинемия

Истинное повышение концентрации белка в крови обычно сопровождается увеличением фракции глобулинов. Встречается при острых инфекциях– увеличение синтеза белков острой фазы, при хронических — за счет γ-глобулинемии, выявляется при болезни Вальденштрема (образование патологических белков – парапротеинов), при миеломной болезни, лимфогрануломатозе, саркоидозе.

Относительная гиперпротеинемия вызывается потерями внутрисосудистой жидкости в результате профузных поносов (например, холере), усиленном потоотделении, неукротимой рвоте, несахарном диабете, тяжелых и обширных ожогах, генерализованных перитонитах.

Моча

Небольшое количество белка в суточной моче присутствует и у вполне здоровых лиц, однако в разовой порции мочи такие концентрации обычными методами не выявляются. Часть этих белков сывороточного происхож­дения, другая часть является продуктом мочевыводящих путей.

Обнаружение в моче белков чаще всего свидетельствует о заболеваниях почек с нарушением почечного фильтра. Принято подразделять протеинурию в зависимости от места возникновения:

  • преренальную, связанную с усиленным распадом белков тканей или выраженным гемолизом;
  • ренальную, обусловленную патологией клубочков или канальцев почек;
  • постренальную, связанную с воспалением мочевыводящих путей.

Спинномозговая жидкость

Повышение количества общего белка в спинномозговой жидкости наблюдается при заболеваниях, приводящих к нарушению гематоэнцефалического барьера (менингит, энцефаломиелит).

Амниотическая жидкость

Исследование количества белка применяют для контроля за течением беременности.

Источник: https://biokhimija.ru/belkovyj-obmen/obchi-belok.html

Общий белок: 5 причин для назначения анализа, норма и отклонения, расшифровка результатов

Методы определения общего белка в сыворотке крови

Этот показатель отражает общее количество всех белков, имеющихся в сыворотке крови. Эти органические вещества играют важную роль в обеспечении работы нашего организма на оптимальном уровне.

Они поддерживают определённое давление в крови (онкотическое), принимают участие в процессах свёртывания крови, обеспечивают транспорт различных веществ, например, жирных кислот, участвуют в реакциях иммунной системы организма, выполняют структурную функцию и другие.

Большая часть белков синтезируется в печени. Поэтому состояние этого органа существенно сказывается на их количественном составе в организме.

В крови здорового взрослого человека норма этого показателя составляет 65 – 85 грамм на литр. Такое же количество отмечается в крови у детей с 14 лет. Для детей первого года жизни нормальное содержание протеина в крови составляет 44 – 73 г/л. От года до двух лет – 56 – 75 грамм на литр. После двух лет уровень общего белка в крови достигает 60 – 80 г/л.

При каких состояниях может понадобиться определение уровня белка?

В результате патологии печени снижается её белоксинтезирующая функция, что приводит к изменению количества этих органических веществ в организме. Поэтому для того чтобы оценить функциональность печени, определяют этот показатель в крови.

Но не только для диагностики заболеваний печени проводится определение концентрации белковых компонентов крови.

Исследование уровня белка поможет при диагностике:

  • онкологических заболеваний;
  • инфекционного процесса;
  • патологии почек;
  • нарушений желудочно-кишечного тракта;
  • различных неотложных состояний.

К любому исследованию нужна подготовка, чтобы избежать влияния посторонних факторов на способность к проведению анализа и получению достоверного результата.

Пациенту следует знать, как правильно подготовиться к исследованию крови.

  1. Первое, что необходимо запомнить – кровь сдаётся натощак, то есть после того, как пациент с вечера ничего не ел.
  2. Второе правило – сдержанность в физическом и эмоциональном плане. Не стоит волноваться и перегружать организм интенсивными мышечными нагрузками. Иногда это может сказаться на результате.
  3. Рекомендуется воздержаться от курения перед забором крови в течение 1 – 2 часов.
  4. Ещё одно правило – сообщить врачу о принимаемых медикаментах. Некоторые могут завышать или занижать значения показателя.

Перед определением содержания белка в организме важно соблюдать обычный питьевой режим. Так как избыточное питьё приведёт к разбавлению сыворотки и снижению белка в крови, а недостаток – к завышенному уровню.

Определение этого показателя в крови проводится колориметрическим методом. Суть его заключается в том, что к белку добавляется вещество. В результате этого взаимодействия образуется окрашенный продукт. Затем измеряют интенсивность окраски.

Концентрация определяемого вещества в сыворотке крови будет напрямую зависеть от интенсивности окраски раствора. Для определения белка может быть использован специальный прибор – колориметр. Измеряется интенсивность окраски, затем вычисляется концентрация вещества.

В современных лабораториях все биохимические анализы крови выполняются на одном автоматизированном анализаторе, где определение общего белка также производится.

Состояние, когда уровень белка в крови повышен, называется гиперпротеинемия. Оно может наблюдаться при следующих ситуациях:

  • инфекционный процесс в организме, при этом может увеличиваться белки острой фазы;
  • заболевания, сопровождающиеся поражающим действием иммунной системы против своего же организма (аутоиммунная патология);
  • лимфопролиферативные заболевания;
  • онкопатология;
  • ожоги;
  • обезвоживание организма.

При каких состояниях общий белок снижен

Гипопротеинемия – так в медицине называется состояние, при котором содержание белка в сыворотке крови ниже нормальных значений.

Причинами гипопротеинемии могут быть:

  • низкое содержание одной из белковых фракций, например, альбумина;
  • нехватка белка в потребляемых продуктах;
  • нарушение усваивания белка, его всасывания в кишечнике. Это может возникать из-за патологии желудочно-кишечного тракта, например, при панкреатите;
  • поражение клеток печени, которое возникает при циррозе, гепатитах, токсическом воздействии;
  • усиленная потеря белка с мочой, вызванная нарушением работы почек;
  • злокачественные новообразования;
  • ожоговая болезнь;
  • образование воспалительной жидкости, а также транссудатов.

Снижение концентрации белка в сыворотке может наблюдаться на фоне капельниц с инфузионными растворами.

Изменение соотношения белков носит название диспротеинемия. А парапротеинемия – состояние, когда обнаруживаются белки, которых в норме быть не должно.

Белок является основным строительным материалом. А беременным очень нужен этот материал. Поэтому важно следить за уровнем белка в потребляемой пище, и при недостатке увеличить продукты, богатые белком: мясо, творог и так далее.

Заметное снижение концентрации белковых компонентов в сыворотке беременных может наблюдаться в третьем триместре, когда малыш уже большой, следовательно, потребность в питательных веществах тоже увеличена.

Врач женской консультации даст советы, как поддерживать содержание белка в крови на необходимом уровне.

Какие ещё показатели определяют для оценки белкового обмена?

При изменении уровня этого показателя в крови необходимо выяснить, почему так происходит. Можно сдать анализ крови на белковые фракции, к которым относятся альбумины и глобулины. Это позволит оценить, за счёт какой фракции произошло отклонение от нормы, предположить причину этого состояния.

Назначение такого исследования, как анализ крови мочевина, может быть полезно для диагностики белкового обмена. Мочевина – конечный продукт обмена белков. Её образование происходит в печени. Затем она выводится через почки.

Не стоит путать исследование уровня мочевины с мочевой кислотой. Мочевая кислота отражает обмен других веществ – нуклеиновых кислот.

Существует множество исследований крови, позволяющих оценить разные процессы в организме. Врач назначает те исследования, которые он считает более информативными в каждом конкретном случае.

Заключение

Общий белок – простой показатель биохимического анализа крови, который позволяет оценить работу многих органов. Важно уделить достаточно внимания подготовке к анализу, чтобы получить точные результаты. Интерпретировать их должен врач, который будет ставить диагноз, используя другие критерии, а не только результаты одного теста.

Оценка статьи

Мы приложили много усилий, чтобы Вы смогли прочитать эту статью, и будем рады Вашему отзыву в виде оценки. Автору будет приятно видеть, что Вам был интересен этот материал. Спасибо!

(3 5,00 из 5)
Загрузка…

Если Вам понравилась статья, поделитесь ею с друзьями!

Вам будет интересно

Источник: https://UstamiVrachey.ru/analizy/obshhij-belok

определение в сыворотке крови общего белка в крови

Методы определения общего белка в сыворотке крови

Под термином «общий белок сыворотки крови» или «общий белок крови» понимается большое количество белков, присутствующих в сыворотке крови и различающихся между собой по структуре, физико-химическим свойствам, функции. Все белки сыворотки крови делят на альбумин и глобулины. В плазме крови помимо альбумина и глобулинов содержится также фибриноген, поэтому содержание общего белка в плазме крови несколько выше, чем в сыворотке.

Нормальные значения общего белка сыворотки крови

В норме содержание общего белка в сыворотке крови составляет у новорожденного до 1 мес — 46,0 — 68,0 г/л, уровень белка в сыворотке у недоношенных может быть намного ниже, чем у доношенных, — в пределах от 36 до 60 г/л, уровень общего белка сыворотки у детей в возрасте 1 — 12 мес — 48,0 — 76,0 г/л, у детей 1 — 16 лет — 60,0 — 80,0 г/л, у взрослых — 65,0 — 85,0 г/л. После 60 лет уровень общего белка в сыворотке крови ниже приблизительно на 2 г/л.

Клиническое значение определения общего белка сыворотки крови

Общий белок сыворотки крови является лабораторным показателем, отражающим состояние гомеостаза. Белки сыворотки крови играют очень важную и многообразную роль.

Благодаря им поддерживается вязкость и текучесть крови и формируется ее объем в сосудистом русле, а концентрация белка обеспечивает плотность плазмы крови, что позволяет форменным элементам удерживаться во взвешенном состоянии.

Белки сыворотки крови осуществляют транспортные (связывание гормонов, минеральных компонентов, липидов, пигментов и т. п.) и защитные (иммуноглобулины, опсонины, белки острой фазы и др.

) функции, участвуют в регуляции кислотно-щелочного состояния организма, являются регуляторами свертываемости крови и антителами. Поэтому содержание общего белка является очень важным диагностическим параметром при целом ряде заболеваний, особенно связанных с выраженными нарушениями метаболизма.

В клинической практике довольно часто встречаются состояния, характеризующиеся изменением концентрации общего белка сыворотки крови. Увеличение концентрации общего белка в сыворотке крови носит название гиперпротеинемии, а снижение — гипопротеинемии.

Увеличение общего белка в сыворотке крови может быть относительным и абсолютным.

Относительная гиперпротеинемия связана с уменьшением содержания воды в сосудистом русле, к чему могут приводить следующие состояния:

  • тяжелые ожоги;
  • генерализованный перитонит;
  • непроходимость кишечника;
  • неукротимая рвота;
  • профузный понос;
  • несахарный диабет;
  • хронический нефрит;
  • усиленное потоотделение;
  • диабетический кетоацидоз.

Абсолютная гиперпротеинемия встречается редко. При этом увеличение общего белка в сыворотке крови может быть связано с синтезом патологических белков (парапротеинов), повышением синтеза иммуноглобулинов или усиленном синтезе белков острой фазы воспаления. Абсолютная гиперпротеинемия наблюдается при следующих заболеваниях:

  • парапротеинемических гемобластозах (миеломная болезнь, болезнь Вальденстрема, болезнь тяжелых цепей) — отмечается значительное — до 120 — 160 г/л — возрастание концентрации общего белка;
  • болезни Ходжкина;
  • хроническом полиартрите;
  • активном хроническом гепатите;
  • острых и хронических инфекциях;
  • аутоиммунных заболеваниях;
  • саркоидозе;
  • циррозе печени без выраженной печеночно-клеточной недостаточности.

Снижение концентрации общего белка в сыворотке крови также может быть относительным и абсолютным.

Относительная гипопротеинемия, как правило, связана с увеличением объема воды в кровеносном русле и наблюдается при следующих состояниях:

  • водной нагрузке («водном отравлении»);
  • прекращении отделения мочи (анурии);
  • уменьшении диуреза (олигурии);
  • внутривенном введении больших количеств раствора глюкозы больным с нарушенной выделительной функцией почек;
  • сердечной декомпенсации;
  • повышенной секреции в кровь антидиуретического гормона гипоталамуса — гормона, способствующего задержке воды в организме.

Абсолютная гипопротеинемия, как правило, связана с гипоальбуминемией. При этом уменьшение концентрации общего белка в сыворотке крови возникает при:

  • недостаточном поступлении белка в организм (голодание, недоедание, сужение пищевода, нарушение функции желудочно-кишечного тракта, например, воспалительного характера — энтериты, энтероколиты и др.);
  • подавлении биосинтеза белка, сопровождающем хронические воспалительные процессы в печени (гепатиты, циррозы печени, интоксикации, атрофия печени);
  • врожденных нарушениях синтеза отдельных белков крови (анальбуминемия, болезнь Вильсона-Коновалова, другие дефектопротеинемии — значительно более редко);
  • повышенном распаде белка в организме (злокачественные новообразования, обширные ожоги, гиперфункция щитовидной железы (тиреотоксикоз), состояния после операции, длительная лихорадка, травмы, длительное лечение кортикостероидами);
  • повышенной потере белка (нефротический синдром, гломерулонефрит, сахарный диабет, длительный (хронический) понос, кровотечения);
  • перемещении белка в «третьи» пространства (асцит, плеврит).

Источник: https://folkmap.ru/krov/opredelenie-v-syvorotke-krovi-obschego-belka-v-krovi/

Поделиться:
Нет комментариев

    Добавить комментарий

    Ваш e-mail не будет опубликован. Все поля обязательны для заполнения.